近日,由徐黎明等人完成的“一種鯉冠狀病毒TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)引物及應(yīng)用”獲國(guó)家發(fā)明專利授權(quán),授權(quán)專利號(hào):ZL202010002911.3。
本發(fā)明屬于病毒分子檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及一種鯉冠狀病毒TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)引物及應(yīng)用。發(fā)明人首次從鯉魚中分離出了一種鯉冠狀病毒(Cyprinid Nidovirus)HL39(保藏編號(hào)為CCTCC NO:V201988),針對(duì)該病毒序列設(shè)計(jì)引物和探針:正向引物F:5'?TTGCGACCCAAAGACGGTTATT?3',反向引物R:5'?CGGTGGTTGAGAGCTTGTAG?3';熒光探針為P:5'?FAM?ACCTCTTACACTCTGCCCCTTTACCT?TAMRA?3'。利用該引物制備的試劑盒,靈敏度高,在50-5×109拷貝數(shù)范圍內(nèi)定量準(zhǔn)確;檢測(cè)速度快,僅1小時(shí),加上RNA提取及逆轉(zhuǎn)錄制備,共僅需3-4小時(shí);可同時(shí)進(jìn)行高通量的樣品檢測(cè)。