由淡水魚類基因組學與基因編輯創(chuàng)新團隊匡友誼等人完成的“斑馬魚成骨細胞體外培養(yǎng)方法”獲得國家發(fā)明專利授權(quán),授權(quán)專利號:ZL202110520788.9。
本發(fā)明涉及一種斑馬魚脊椎骨組織成骨細胞的培養(yǎng)方法。斑馬魚脊椎成骨細胞系是開展魚類骨骼發(fā)育機制研究不可或缺的材料,發(fā)明人利用利用組織塊貼壁法,以斑馬魚脊椎組織為材料成功構(gòu)建了斑馬魚脊椎成骨細胞系。該方法建立的細胞系生長迅速穩(wěn)定,復蘇狀態(tài)良好,經(jīng)鑒定細胞系中期分裂相的染色體數(shù)目、核型與斑馬魚一致,堿性磷酸酶、茜素紅礦化結(jié)節(jié)染色及von Kossa氏礦化結(jié)節(jié)法染色均呈陽性,成骨細胞發(fā)育標志基因runx2a、bglapl和alp的表達量顯著高于斑馬魚肌肉組織,且流式RNA-FISH檢測結(jié)果表明98%以上的成骨細胞均表達sp7。
本方法簡單易行且成本較低,有效避免了原代組織用酶消化培養(yǎng)方法作用時間長、對細胞損傷大、影響細胞貼壁及成活的問題。